博精科技為您分享:分光光度計的基本工作原理是利用物質(zhì)對某種波長的光具有選擇性吸收的特性建立起來的鑒別物質(zhì)或測定其含量的一項技術(shù)。物質(zhì)對光(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶,所以,當(dāng)光色散后的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。
HITACHI原子吸收分光光度計ZA3000
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,即符合比爾定律。
T=l/lo lg (lo/l) =εcb
T為透過率,lo為入射光強度,1為透射光強度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數(shù),b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時,透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
朗伯一比爾定律概念圖
分光光度計主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計結(jié)構(gòu)圖
常用的波長范圍為:(1)200--400nm的紫外光區(qū),(2)400~760nm的可見光區(qū),(3)2. 5~25μm(按波數(shù)計為4000cm~400cm)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本錄規(guī)定,定期進行校正檢定。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
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